外泌体在乙肝病毒感染肝细胞过程中的免疫功

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前言

前面我们有报道HIV-1感染CD+细胞来源的外泌体可通过HIVTARRNA促进肿瘤生长及进展，胞外囊泡在各种生理病理过程中发挥的作用超乎我们的想象。近日，一篇题为“TheimmunologicalfunctionofextracellularvesiclesinhepatitisBvirus-infectedhepatocytes”在线发表于《PlosOne》，报道了胞外囊泡在乙肝病毒感染肝细胞中所发挥的作用。

乙型肝炎病毒(HBV)可产生大量完整和不完整的病毒颗粒，除了其感染性，这些粒子的功能仍然难以捉摸。本文中，作者研究了外泌体、完全颗粒和不完全颗粒对靶细胞的影响。这些颗粒被单核细胞/巨噬细胞吞噬，主要作用是上调PD-L1。EVs的功能和组成受核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTIs)的影响，提示EVs参与了NRTIs患者HBV肝炎的发病机制和临床过程。

研究思路

Figure1：HepAD38细胞（四环素诱导下可表达HBVpgRNA下）分泌的EVs被单核细胞内吞，PD-L1表达水平上调：将HepAD38细胞表达或者不表达HBV时分泌的EVs取出，与人PBMC共孵育，发现特异性地被单核细胞吞噬，PD-L1表达水平上调。

Figure2：采用超离从10mL的乙肝病毒(HBV)复制或不复制的HepAD38细胞培养上清中收集EVs。收集的EVs采用碘氧嘧啶密度梯度法分离外泌体，亚病毒颗粒，病毒粒子。将外泌体，亚病毒颗粒，病毒粒子与PBMC持续共孵育24小时，检测PD-L1/CD69/PD-L2的表达，发现外泌体、亚病毒颗粒和病毒粒子诱导单核细胞PD-L1上升、CD69下降。

Figure3：作者用恩替卡韦(ETV)、拉米夫定(LMV)和替诺福韦(TDF)处理表达或者不表达HBV的HepAD38细胞9天后收集上清提取EVs，与PBMC共孵育后，发现TDF处理过后的胞外囊泡显著提升了PD-L1，提示TDF治疗可增强EVs的免疫抑制作用。WB证明碘氧嘧啶密度梯度法分离后的各层分子CD9,CD63,HBsAg和HBcAg的表达量。

Figure4：NRTIs治疗后细胞外囊泡和细胞内间隙外泌体标记物和病毒蛋白丰度对比：EVs中HBsAg减少，而胞内CD63、HBsAg增多。

Figure5：NRTIs治疗后乙肝病毒(HBV)复制的HepAD38细胞内间隙和细胞上清液pgRNA水平。既往报道NRTIs治疗后慢性乙型肝炎患者血清中基因组前RNA(pgRNA)病毒粒子水平升高，作者实验证实TDF处理后胞外pgRNA水平显著上升。这些结果与之前的研究一致，提示TDF治疗后免疫抑制效果的增强是由于EV组成的改变或上清中pgRNA的增加所致。

总结

EVs摄取后单核细胞PD-L1上调可能通过抑制T细胞参与HBV感染进程，库普弗细胞和浸润性单核/巨噬细胞PD-L1的表达上调与肝炎症和抗病毒免疫密切相关。这篇文章证实了为什么NRITs和联合PD-1阻断抗体治疗HBV效果较好，考虑到作者们的研究结果，这种联合治疗有可能对于ETV停止后的复发和暴发性肝炎的效果较好。

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参考文献：KakizakiM,YamamotoY,YabutaS,KurosakiN,KagawaT,KotaniA:TheimmunologicalfunctionofextracellularvesiclesinhepatitisBvirus-infectedhepatocytes.PloSone,13(12):e.

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